تکنیک‌های جوانه زنی هاگ

پس از تهیه هاگ‌های لازم و مطلوب می‌توان کشت هاگ را آغاز کرد،

بدین ترتیب که ابتدا حلقه تلقیح یا تیغ جراحی را با حرارت شعله به مدت پنج تا ده ثانیه استریل نموده، سپس آن را داخل یک بطری دیش حاوی محیط کشت استریل فرو کرده، می‌گذاریم کمی خنک شود آنگاه بوسیله آن، هاگ‌ها را کم‌کم از روی کاغذ برداشته و بصورت خط‌‌ خط یا زیگزاک بر روی سطح آگار پخش می‌کنید. جهت افزایش شانس موفقیت جوانه‌زنی هاگ‌ها، می‌توان بطور همزمان و سریع  سه بطری دیش را با هم تلقیح نمائیم که به این روش اصطلاحا کشت چندگانه یا توده‌ای هاگ می‌گویند. 

جذب رطوبت توسط هاگ

به مرور زمان که از تلقیح می‎گذرد، هاگ‌ها رطوبت جذب کرده متورم شده و درصد جوانه‌زنی آنها افزایش می‌یابد که چنانچه به رطوبت کافی دست نیابند، چروکیده و به سهولت جوانه نخواهند زد که در این حالت می‌توان با مرطوب کردن هاگ‌های خشک با آب استریل، جوانه‌زنی آنها را بهبود بخشید.

برای مرطوب کردن هاگ‌ها، بهتر است از ابزار مناسب همچون قطره‌چکان چشمی، پیپت یا سورنگ آمپول، یک لوله آزمایش پر از آب مقطریا یک فلاسک ارلن مایر به حجم ۲۵ تا ۲۵۰ سانتیمتر مکعب که درب آن را با پنبه بسته و روی آن را با یک فویل آلومینیومی کاملا مسدود نموده و در شرایط kg/cm 07/0 و به مدت ۳۰ دقیقه با دمای ۱۲۱  سیلسیوس کاملا استریل شده‌اند، استفاده نمائید.

بعد از این مرحله با دقت مقداری هاگ را با تیغ جراحی استریل از محیط کشت برداشته و درون آب مقطر از قبل تهیه شده بریزید ودر آن را محکم بسته و ۶ تا ۱۲ ساعت در مکانی ساکن بگذارید. پس از این مدت، چند میلی‌لیتر از این محلول حاوی هاگ را با قطره‌چکان استریل برداشته و چند بطری دیش را با یک یا دو قطره از آن تلقیح نمائید و آماده مراحل بعدی باشید.

خصوصیات میسلیوم قارچ خوراکی

۳ تا ۷ روز بعد از تلقیح، هاگ‌ها شروع به جوانه‌زنی نموده که به صورت رشته‌های سلولی نخ مانند(هیف) منشعب از یک نقطه مرکزی در سطح محیط کشت ظاهر می‌شود و به سرعت با گسترش این رشته‌ها و در هم رفتن آنها شبکه میسلیومی بوجود می‌آید. که در ابتدا به صورت غیر مستقیم وبه رنگ خاکستری بوده و بعد از مدت بسیار اندک با تقسیم وتکثیر هیف‌های بیشتر و گسترش آنها درون محیط کشت به رنگ سفید در می‌آیند.

رنگ میسلیوم اکثر گونه‌ها بویژه دکمه‌ای، شی‌تاکه، قارچ رقیب کلاهدار، پانالوس، سیلوسب خاکستری مایل به سفید است و در گونه‌های دیگر همچنین آبی مایل به ارغوانی و گونه خاص سیلوسب قهوه‌ای می‌باشد. در مجموع، تنوع رنگ تابع نژاد قارچ، روش تکثیر و محیط رشد و پرورش می‌باشد.

میسلیوم از نظر رویش به انواع زیر تقسیم می‌شود:

 هوایی، مسطح، پنجه‌ای یا ریشه مانند

میسلیوم هوایی در گونه‌های مرطوب‌زی دیده می‌شود، حال آنکه میسیلیوم مسطح بیشتر در شرایط خشک دیده می‌شود.

پس از شناخت نوع میسلیوم، بایستی قسمت رویان هاگ‌ها را به ظروف کشت جدید منتقل نمود. به این ترتیب پرورش دهنده، به طور انتخابی میسلیوم‌های خوب و بد را از همدیگر جدا کرده و بعد از مدتی کوتاه به کشت خالص و عاری از هر گونه آلودگی دست می‌یابد و در این مرحله نیز چنانچه آلودگی اندکی به چشم بخورد، بهتر است آن را از کلونی خارج نموده.

با توجه به اینکه بسیاری از آلودگی‌های متداول، ناشی از کپک‌های هاگزا می‌باشند، لذا باید مراقب بود تا محیط کشت را تکان نداده و یا کاری نکرد که باعث انتشار هاگ‌های این قبیل قارچ‌ها گردید.

همچنین باید از خنک بودن تیغ جراحی قبل از دخول آن به درون محیط آگار اطمینان حاصل کرد، زیرا یک تیغ و یا هر گونه وسیله داغ که به داخل آگار وارد می‌شود، باعث تولید بخار ناگهانی درون بطری دیش و در نتیجه موجب رها سازی هاگ کپک‌های مجاور می‌شود.